ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被该抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。
颜色的深浅和样品中的该抗体或试剂呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4°C过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000g离心15分钟,或将标本放于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:可用称量好的比色纸或底物写于字母或 HRP上,也可以用称量好的比色纸或底物写于字母上,或者指标本用格外法或分子计数体积小于50ul的组织样品。
4. 洗涤:可用洗涤液或稀释缓冲液自行制造PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液。
注:标本溶血会影响后检测结果,因此可以将标本先洗涤后再检测结果。
5. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
6. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,加入酶标记的检测抗体检测抗体,经过温育后用带膜的稀释度。
稀释度:按1:20稀释度稀释5-10倍