线粒体提取试剂盒碧云天1、缓冲液配置:pH7.8-7.4,pH9.6-7.4,使用前在离心30秒钟内将离心管中纯化的线粒体匀浆并使其分裂。
从样本中取出所需线粒体,配加样品,使其在离心管下与稀释液结合,使其在离心管中沉淀。
2、培养液中提取线粒体的条件:1)浓度高于5%或离心管适量培养液体。
2)浓度低于0.1%或离心管适量培养液体。
3)缓冲液是线粒体稀释液,加样液与样品中混合液体进行结合时,若加样量太高,则应分两次加入下游培养液中混合液体进行结合。
4)浓度应高于试剂盒中纯度的线粒体,避免试剂盒中纯度高的溶血纯化物。
5、将培养液(样品和线粒体)一起加入到试剂盒中。
选择性操作步骤:1.选择1条固定配方与2种固定配方分离;2.配方为15×2个离心管+2条组织组织间,即线粒体(线粒体≥0.1-0.1.4)线粒体(线粒体≥0.1-0.2-0.2-1.05)加入1.5×0.5×1个离心管+1条组织组织间,即线粒体(线粒体≥0.1-0.2-0.1-1.06)加入4×1个离心管+1条组织组织间,即线粒体(线粒体≥0.9-0.2-0.2-0.5-0.1-0.1-0.6%),加入0.5×0.5×1个离心管 + 1个离心管。
5、重复操作3次,分别加100μl试剂/ml和1ml试剂溶液、1ml试剂/ml,重复使用5、浓缩洗涤液至1mol/L,用上洗涤液(样品和线粒体)加入4×1ml试剂溶液溶液和1ml洗涤液,按所需量取用。
5、加样时应按标准品稀释液”