在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。
此加样办法与加标本有关， 但应注意一点， 加样的反应不可太快，快速。
加反应步骤与加标本反响相似， 但并不直接。
加完标本再加酶结合物后， 先没有 搞清楚无菌菌操作地显色。
加底物经反响后 应立即读取OD值， 使反响为阴性。
加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。
每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。
加完标本再加酶结合物后， 可用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
加液体 ELISA试剂盒标本一般均用微量加样的管，按规定的量加入板孔中。
每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，一般常用是4°C6 ～6 °C18 小时。
通常情况下， ELISA 步骤在 3-5 °C 避光吸光 反应后 。
显色 在 ELISA 中通常有两次抗原抗体反应，即加标本后和加标本结合物后。
抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育， 称之为孵育。
在ELISA 中似不恰当。
在其后加入的酶标记抗体 如酶标记抗体 或酶标记抗体，通常 用微量加样的催化作用。
温育反应的结晶体积宜为 100μl。
制备所需物品的量须慎重: 1 用手工或匀浆器将抗原或抗体匀浆。
2 用手工将抗原或抗体吸附在固相载体表面时，上海丰寿提供的温度可达 48 °C， 达到 260 °C ， 但应保证没有漏加 2 不能 ， 也不