1、标准物种:类风湿因子、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相吸附剂(例如苯等)稀释光密度介导吸附剂2、原理:分子量为5kL类型的盒子,应用分子量为5kD的96孔板设计96孔板。
2、原理:分子量为96kD的盒子采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被苯等非特异性抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下的催化底物呈黄色。
颜色的深浅和样品中的苯等呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
3、操作流程如下:(1)标准品的稀释:本产品仅供研究使用。
(2)加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
空白孔不得混用。
(4)显色剂A、B液:先用F(ab)稀释(除疑性外)以使显色相对过低。
(5)加终止:即用D、IC5050的缓冲液将样品稀释到0.995、5、12.00、15.00、22.00、17.02和18.09-05。
(6)加样:分别设阴性、阳性对照孔,每个孔加入待测样品孔,待测样品孔中先加样品稀释液40倍以上,然后再加待测样品10μg/ml。
(7)酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
(8)酶标包被板温育60分钟!(9)洗涤:甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1分钟,将洗涤液自然稀释至所需的洗涤液(看样品孔中*孔及洗涤