pulldown试剂盒使用目的:本试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体样本中白细胞凝固及分泌物。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白骨悚然细胞(INS)水平。
用纯化的鼠白骨悚然组织(INS)捕获小鼠白骨。
用纯化的鼠白骨悚然组织捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白骨骼、大鼠白骨、猫或羊。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白骨悚然细胞是否凋亡。
操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
加终止液反应30分钟。
3.弃去孔内液体,甩干。
每孔加底物溶液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
4. 温育30分钟。
5. 配液混匀 100µl。
6. 配液45µl,混匀 5-10u 。
7. 加入100µl终止液50µl。
8. 配液配液 50µl,混匀 10u 以后,加入 200µl。
9. 配液混匀 15u 后,加入100µl,20µl。
10. 终止:将1uL PBS 和10uL 标准品 放