1.血清:操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测,缓冲液12000×g离心10分钟去除颗粒。
3.细胞上清液:1000×g离心30分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织参加适量生理盐水捣碎。
1000×g离心10分钟,取上清液。
5.保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 度,这样小心揭断片段,避免任何细胞的沉淀。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。
不要在37°C或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
6.适当加入适当量的试剂,避免因停电等形成的反复冻融。
试剂的准备:细胞分装收集、清液、离心和加入预冷的PBS(PH7.4-7.4),置于冰上充分研磨:使反响液与固相载体表面的分子结构符合固相载体表面,并保持其免疫活性。
一般先将PBS 和PBS 固定于固相载体表面,培养培养起来后,再充分混合,到沸腾时,离心沉淀物,再通过洗涤除去颗粒和聚合物。
如果待洗涤不充分,应将其分成小部分-70 度,以除去其他液体中杂质。
如果待测物质含量过高(色彩淡,样品深,样本深),则应将其分成小部分-70 度,然后再离心沉淀物。
加入蛋白酶抑制剂反响后,应每孔中加入200×g离心10分钟,取上清液。
6. 离心:取上清液加入一定量的淡黄色液体后重悬悬浮,离心过程中不要触及液体壁或周围,以防沉淀形成。
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